FlowJo v7.6.5 中文版破解

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FlowJo 是一款专业的流式细胞分析软件，能够兼容多种流式仪器所采集的数据，通过图像分析细胞的各种特征变化。它不仅易于操作，而且功能强大，支持真实模拟数据。FlowJo 使用色彩丰富的二维图表进行系统化分析，帮助用户更清楚地理解细胞的状态变化。软件结合了流动室、液流驱动系统、光电转换器以及数据处理系统等多项先进技术。

FlowJo 的主要功能

1. 单标记样本

单标记样本的数据通常以单一参数的直方图显示。横坐标代表荧光或散射光的强度，可以选择线性或对数标度，纵坐标则表示特定荧光强度下的细胞数，或者用相对百分比表示。

以3 color comp 文件夹中的 CyPE comp.fcs 文件为例，进行数据分析。将文件夹移至桌面并将其拖拽到 FlowJo 的工作区。

在工作区中点击选择“3 color comp”组，随后所有样本将在样本空间中展示。接着，双击“Cy5PE comp.fcs”，此时图形窗口会自动打开。

该窗口为二维点图，X轴设置为SSC（侧向散射，细胞内部颗粒越多，SSC值越大），Y轴设置为FSC（前向散射，细胞越大，FSC值越大）。

选择设门工具（矩形门、椭圆门、多边形门、自动门），在二维点图中选择淋巴细胞。

在图形窗口中，双击选中的淋巴细胞，生成新的图形窗口，X轴选择Cy5PE:CD4，Y轴选择Histogram，选择设门工具中的任意一个，在单参数直方图中设定门限。

2. 多色标记样本

多色标记样本包含双标记、三标记等，横纵坐标分别表示两个独立的细胞参数，图上的每个点代表具有特定坐标值的细胞。

例如，选择3-color-experiment文件夹中的931115-B02-Sample01.FCS进行分析。在样本空间中双击该文件，打开图形窗口，显示为二维点图，X轴为FSC，Y轴为SSC。选择多边形设门工具，选中淋巴细胞。

双击淋巴细胞门，打开图形窗口，X轴选择Fluor::CD3，Y轴选择FSC。使用矩形门工具选中CD3阳性细胞，并将其命名为“T细胞”。

双击T细胞门，再次打开图形窗口，X轴选择Cy5PE::CD4，Y轴选择PhyEry::CD8，使用十字门工具进行设门，将四分门移动到合适位置。此时的结果如下：

Q1：CD8单阳性细胞，表示CD8+ T细胞

Q2：双阳性细胞

Q3：CD4单阳性细胞，表示CD4+ T细胞

Q4：双阴性细胞

3. 细胞凋亡（Cell Apoptosis）

加载凋亡样本后，双击打开原始数据图形窗口，X轴选择FSC-A，Y轴选择SSC-A。选定图中所示的细胞群体进行凋亡分析，排除细胞碎片。

在SSC/FSC图中，双击“分析的细胞群体”，X轴选择FITC（表示AnnexinV-FITC），Y轴选择PE-Texas（表示PI）。使用四分门工具划分活细胞与凋亡细胞，结果如下：

Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI+，表示坏死细胞，可能含有部分晚期凋亡细胞。

Q2：AnnexinV+FITC+/PI+，表示晚期凋亡细胞。

Q3：(AnnexinV-FITC)+/PI-，表示早期凋亡细胞。

Q4：(AnnexinV-FITC)-/PI-，表示活细胞。

细胞凋亡率通常通过Q2+Q3（晚期凋亡与早期凋亡群体）来统计。

4. 细胞周期（Cell Cycle）

细胞周期分析是流式细胞术的广泛应用之一。细胞周期指的是细胞经历的过程，从有丝分裂结束到子细胞分裂完成。其主要阶段包括G1期、S期、G2期和M期。细胞在G1期进行生长和物质准备，在S期复制DNA，在G2期进行检查与修复，最后在M期完成细胞分裂。

在细胞周期检测中，PI（碘化丙啶）常用于标记细胞。PI可以选择性地嵌入DNA和RNA的双螺旋结构，并且其结合量与DNA含量成正比。通过流式细胞仪分析，可以得出各个细胞周期阶段的DNA分布情况，并计算各阶段细胞的比例。

例如，以cell cycle文件夹中的5206.001样本为例，选定目标细胞群体，排除细胞碎片。首先，双击5206.001样本，打开图形窗口，X轴选择FSC-H，Y轴选择SSC-H。设门选择细胞群体，排除细胞碎片。

接下来，选择单细胞群体进行细胞周期分析，避免粘连细胞的干扰。X轴选择FL2-W（表示PI的宽度），Y轴选择FL2-A（表示PI的面积），设门方式如下：

对于BD流式仪的数据，细胞周期分析通常使用FL2-A和FL2-W（或者FL2-A和FL2-H）进行设门。

对于Beckman流式仪的数据，X轴选择FL3-LIN（表示PI的线性信号），Y轴选择FL3-PEAK（表示PI的峰值信号），设门方式如下：

在FlowJo工作区中，选中“单细胞群体”节点，在菜单中选择“工具”，然后点击“细胞周期”，打开细胞周期分析窗口。此时可以得到G1期、S期和G2期的细胞百分比，以及G1和G2的CV值等数据。

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